細胞轉染：脂質體轉染的幾個實驗方法

實驗原理脂質體(LR)試劑是陽離子脂質體DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前條件下方面的轉染方法之一。轉染率高，優于磷酸鈣法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA轉染到各種細胞。用LR進行轉染時，首先需要優化轉染條件，應找出該批LR對轉染某一特定細胞適合的用量、作用時間等，對每批LR都要做。先要固定一個DNA的量和DNA/LR混合物與細胞相互作用的時間，DNA可從1-5ug和孵育時間6h，開始，按這兩個參數繪出相應LR需...

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細胞計數與存活測試實驗介紹

實驗材料0.4%w/vtrypanblue(GibcoBRL15250-061)Erythosinbluishstain取0.1gramErythrosinbluish(SigmaE-9259)及0.05grampreservativemethylparaben(SigmaH-3647)溶于100mlCa/Mgfreesaline血球計數盤及蓋玻片(Hemocytometerａndcoverslip)計數器(counter)低倍倒立顯微鏡粒子計數器(Coultercounte...

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細胞轉染實驗介紹

一、實驗目的學習和掌握外源基因導入真核細胞的主要方法——脂質體介導的轉染。了解外源基因進入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白），為染色準備實驗材料。二、實驗原理上圖所示是脂質體介導轉染的示意圖，它顯示了外源質粒進入細胞的一般過程。外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法和病毒介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入；磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞；病毒法是利用包裝...

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細胞株與細胞系的區別介紹

一、細胞株細胞株（CellStrain）：也就是說，細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。原代培養物經傳代成功后即為細胞系(cellline)，由原先存在于原代培養物中的細胞世系所組成。如果不能繼續傳代，或傳代次數有限，可稱為有限細胞系(finitecellline)，如可以連續培養，則稱為連續細胞系(continuouscellline)，培養50代以上并無限培養下去。所以細胞株是通過選擇法或克...

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IPS細胞操作方法

操作規程一、復蘇1、事先用Matrix進行培養皿/板的包被處理。平時Matrix保存在-20℃，使用之前放在4℃冰箱或冰上進行解凍。待Matrix解凍后，按1：100的比例迅速用PBS液體稀釋。按6孔板每孔加1ml，150px皿加2ml，250px皿加3ml的量加入，加入后迅速搖動皿/板，使加入的Matrix*覆蓋整個皿底。放到37℃培養箱中4小時，使用前去掉包被液（如果暫時不使用，用封口膜密封，在4℃冰箱能保存一周）。2、復蘇前準備iCell解凍*培養基（iCell解凍液基...

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