細胞培養步驟及注意事項

更新時間：2020-02-10

點擊次數：4086

細胞培養步驟：

1.培養基及培養凍存條件準備：

①準備F-12K培養基（F-12K : GIBCO,貨號：21127-022);北美胎牛血清，10%; PS 1%。

②培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

③凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

2.細胞處理：

①復蘇細胞：將含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

②細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

注意事項：

①收到細胞后，若發現干冰己揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

②所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。